प्रोबायोटिक्स और स्वास्थ्य जर्नल
खुला एक्सेस

अमूर्त

फ्लोरोसेंट धुंधलापन और फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोपी के माध्यम से प्रोबायोटिक लैक्टोबैसिलस एसिडोफिलस की कोशिका भित्ति अखंडता और प्रोटोप्लास्ट गठन

रयान पेज, डेविड बर्क, कयानुश आर्याना

जीवाणु कोशिकाओं के प्रोटोप्लास्ट की पहचान के लिए पहले चरण विपरीत माइक्रोस्कोपी का उपयोग किया गया है। यह विधि प्रोटोप्लास्ट को उनके आकार और आकार में परिवर्तन के आधार पर निर्धारित करती है। एक अधिक सत्यापन योग्य विधि का उपयोग फ्लोरोसेंट दागों का उपयोग करके किया जा सकता है जो विशिष्ट सेलुलर घटकों को लक्षित करते हैं। इस अध्ययन का लक्ष्य सेल दीवार पाचन एंजाइमों के संपर्क में आने के बाद प्रोबायोटिक लैक्टोबैसिलस एसिडोफिलस में बैक्टीरिया कोशिका दीवारों की उपस्थिति या अनुपस्थिति को निर्धारित करने के लिए फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोपी तकनीकों का उपयोग करना था । बैक्टीरिया कोशिकाओं को लाइसोजाइम [0, 175, 250, 425 μg/ml] की विभिन्न सांद्रता के साथ इलाज किया गया और दस मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किया गया। लाइसोजाइम उपचार के बाद कोशिकाओं को दो फ्लोरोसेंट रंगों, गेहूं-जर्म एग्लूटिनिन (WGA) और होचस्ट 33342 की विभिन्न सांद्रता (1x, 2x, 10x, और 100x) के साथ फ्लोरोसेंट रूप से रंगा गया। WGA [CF ^® 594 WGA, एक लाल-फ्लोरोसेंट डाई] का उपयोग सेल की दीवार की पेप्टिडोग्लाइकन परत के अवशेषों से चुनिंदा रूप से बंधने के लिए किया गया था और होचस्ट 33342, एक नीली फ्लोरोसेंट डाई, का उपयोग बैक्टीरिया कोशिकाओं के दोहरे स्ट्रैंडेड डीएनए के न्यूक्लिक एसिड से विशेष रूप से बंधने के लिए किया गया था। फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी के लिए नमूना तैयार करने की मानक विधि का पालन किया गया। प्रत्येक लाइसोजाइम और दाग संयोजन के लिए तीन क्षेत्रों का अध्ययन किया गया। लाइसोजाइम सांद्रता में अंतर निर्धारित करने के लिए एकतरफा एनोवा का प्रदर्शन किया गया। एक p-मान < 0.05 को महत्वपूर्ण रूप से भिन्न पाया गया। 175 और 250 μg/ml लाइसोजाइम पर कोशिका भित्ति की संरचनात्मक अखंडता खराब होने लगी और 425 μg/ml की सांद्रता पर डीएनए की कोशिका अपघटन और धारियाँ बढ़ गईं। 175 μg/ml की लाइसोजाइम सांद्रता ने औसतन 41% प्रोटोप्लास्ट या कोशिका भित्ति का आंशिक पाचन उत्पन्न किया। 175 से 250 μg/ml लाइसोजाइम की सांद्रता में वृद्धि के परिणामस्वरूप प्रोटोप्लास्ट का औसत प्रतिशत कम (4%) हुआ। 425 μg/ml की सांद्रता पर, प्रोटोप्लास्ट का औसत प्रतिशत घटकर 1% हो गया, जबकि डीएनए की धारियों में भी वृद्धि देखी गई। 1x डाई सांद्रता पर, कोशिका भित्ति का आंशिक धुंधलापन देखा गया। 100x पर डाई सांद्रता ने कोशिका भित्ति और नाभिक में डाई की अधिक संतृप्ति पैदा की जिससे वे आपस में मिल गए और बैक्टीरिया कोशिकाओं और प्रोटोप्लास्ट की पहचान करने की प्रभावकारिता को बाधित कर दिया। 2x कोशिका भित्ति और नाभिक के पूर्ण धुंधलापन के लिए सबसे इष्टतम था। डाई की सांद्रता बढ़ने पर पृष्ठभूमि प्रतिदीप्ति शोर देखा गया। लैक्टोबैसिलस एसिडोफिलस में , 175 μg/ml की लाइसोजाइम सांद्रता कोशिका भित्ति पाचन के लिए पर्याप्त थी। डाई सांद्रता की प्रभावकारिता 2x पर सबसे कम पृष्ठभूमि शोर के साथ सबसे अच्छी थी।