क्लिनिकल परीक्षण जर्नल
खुला एक्सेस

अमूर्त

ℇ34 फेज टेलस्पाइक प्रोटीन: इन विट्रो लक्षण वर्णन, संरचना पूर्वानुमान, एस. न्यूिंगटन एलपीएस के साथ संभावित अंतःक्रिया और पशु कोशिका रेखा के लिए साइटोटॉक्सिसिटी आकलन

जोसेफ ए अयारिगा, लोगान गिल्डिया, होंगझुआन वू, रॉबर्ट विलाफेन

ℇ34 फेज, फेज के पोडोविरिडे परिवार (छोटे गैर-संकुचित पुच्छीय बैक्टीरियोफेज) का सदस्य है, जो अपने मेजबान के रूप में साल्मोनेला न्यूइंगटन का उपयोग करता है। यह फेज बैक्टीरियल होस्ट के लिपोपॉलीसेकेराइड्स (LPS) और उसके टेलस्पाइक प्रोटीन (TSP) के बीच एक विशिष्ट अंतःक्रिया के माध्यम से अपने मेजबान के संक्रमण की शुरुआत करता है । ℇ34 TSP संरचनात्मक रूप से समान और कार्यात्मक रूप से P22 फेज के समतुल्य है, जिसके TSP को अच्छी तरह से वर्णित किया गया है और दोनों फेज के इलेक्ट्रॉन माइक्रोग्राफ़ अप्रभेद्य दिखाई देते हैं। S. टाइफीम्यूरियम के O-एंटीजन के साथ जटिल P22 फेज TSP की क्रिस्टल संरचना निर्धारित की गई है; और TSP की सक्रिय साइट को रिसेप्टर बाइंडिंग डोमेन के अवशेष Asp392, Asp395 और Glu359 के रूप में प्रदर्शित किया गया है। E15 नामक एक अन्य फेज में, जो ℇ34 फेज का एक फीलोजेनेटिक रिश्तेदार है, α-Gal-Man-Rha दोहराई जाने वाली इकाइयों से युक्त एक छोटा पॉलीसैकेराइड E15 फेज और साल्मोनेला एनाटम के LPS के बीच परस्पर क्रिया के लिए जिम्मेदार है, जिससे बैक्टीरिया में फेज का अवशोषण होता है। ℇ34 फेज पर किए गए अध्ययनों से पता चलता है कि यह LPS के साल्मोनेला न्यूिंगटन के O एंटीजन पॉलीसैकेराइड घटक के साथ परस्पर क्रिया करता है, इस पॉलीसैकेराइड में मैनोसिल-रहमनोसिल-गैलेक्टोज दोहराई जाने वाली इकाइयाँ होती हैं जो β-गैलेक्टोसिल लिंकेज द्वारा एक साथ जुड़ी होती हैं। हालाँकि, ℇ34 TSP के विशिष्ट अवशेषों के बारे में कोई डेटा मौजूद नहीं है जो LPS बाइंडिंग और हाइड्रोलिसिस के लिए जिम्मेदार हैं।

इस अध्ययन में, टेलस्पाइक जीन को वेक्टर pET30a-LIC पर क्लोन किया गया और विस्तारित ℇ34 TSP (Eℇ34 TSP) नामक फ्यूजन प्रोटीन के रूप में व्यक्त किया गया। हमने प्रोटीन को गर्मी, SDS और प्रोटीज़ के प्रतिरोध के आधार पर अभिलक्षित किया; यह दिखाते हुए कि प्रोटीन गर्मी प्रतिरोधी है, SDS ग्रेडिएंट की उपस्थिति में असामान्य इलेक्ट्रोफोरेटिक गतिशीलता दिखाता है, और P22 फेज हेड्स से सक्रिय रूप से जुड़कर हाइब्रिड फेज बनाता है जो P22 होस्ट को संक्रमित नहीं कर सकता। हम सिलिको अध्ययन के माध्यम से यह भी प्रदर्शित करते हैं कि ℇ34 TSP ALA250, SER279 और ASP280 अवशेषों के माध्यम से अपने होस्ट के O-एंटीजन से जुड़ता है और उसे हाइड्रोलाइज़ करता है ।