क्लिनिकल और सेलुलर इम्यूनोलॉजी जर्नल
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नैनोलिटर ड्रॉपलेट माइक्रोएरे में टी सेल डायनेमिक एक्टिवेशन और कार्यात्मक विश्लेषण

सहेली सरकार, विन्नी मोटवानी, पूजा सभाचंदानी, नोआ कोहेन और तानिया कोनरी

उद्देश्य: प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं में विविधता की विशेषता के लिए गतिशील एकल कोशिका प्रतिक्रियाओं के साथ-साथ विभिन्न प्रतिरक्षा कोशिका उपसमूहों के बीच अंतःक्रियाओं का आकलन करना आवश्यक है। प्रभावकारी कोशिकाओं की परिपक्वता और सक्रियण कोशिका संपर्क-निर्भर और घुलनशील कारक-मध्यस्थ पैराक्राइन सिग्नलिंग द्वारा विनियमित होता है। वर्तमान में कुछ विधियाँ उपलब्ध हैं जो गैर-आसंजन कोशिकाओं को शारीरिक रूप से बाधित किए बिना और पड़ोसी कोशिका युग्मों से क्रॉसटॉक को समाप्त किए बिना दोनों प्रक्रियाओं की एक साथ गतिशील जाँच की अनुमति देती हैं। हम यहाँ एक माइक्रोफ्लुइडिक ड्रॉपलेट माइक्रोएरे प्लेटफ़ॉर्म का वर्णन करते हैं जो एकल कोशिका प्रतिक्रियाओं के तेज़ कार्यात्मक विश्लेषण और हेटरोटाइपिक सेल युग्मों के सह-एनकैप्सुलेशन की अनुमति देता है, जिससे हमें प्राथमिक टी कोशिकाओं की गतिशील सक्रियण स्थिति का मूल्यांकन करने की अनुमति मिलती है।
विधियाँ: माइक्रोफ्लुइडिक ड्रॉपलेट प्लेटफ़ॉर्म मोनोडिस्पर्स नैनोलिटर वॉल्यूम (0.523 nL) बूंदों की पीढ़ी और डॉकिंग को सक्षम बनाता है, जिसमें प्रति प्रयोग एक हज़ार बूंदों की निगरानी करने की क्षमता होती है। एकल मानव टी कोशिकाओं को बूंदों में एनकैप्सुलेट किया गया और कैल्शियम आयनोफोर आयनोमाइसिन के साथ ऑन-चिप उत्तेजित किया गया। टी कोशिकाओं को ओवलब्यूमिन पेप्टाइड द्वारा सक्रिय डेंड्राइटिक कोशिकाओं के साथ भी सह-संपुटित किया गया, इसके बाद गतिशील कैल्शियम सिग्नल मॉनिटरिंग की गई।
परिणाम: आयनोमाइसिन-उत्तेजित कोशिकाओं ने नियंत्रण की तुलना में कैल्शियम सिग्नलिंग में उतार-चढ़ाव दर्शाया। दोनों कोशिका आबादी ने प्रतिक्रियाओं में उल्लेखनीय विविधता का प्रदर्शन किया। डीसी के संपर्क के तुरंत बाद टी कोशिकाओं में कैल्शियम सिग्नलिंग देखी गई, जो एक प्रारंभिक सक्रियण संकेत का सुझाव देती है। टी कोशिकाओं ने कैल्शियम के स्तर में गैर-संपर्क मध्यस्थता वृद्धि को आगे दिखाया, हालांकि संपर्क-मध्यस्थ संकेतों की तुलना में यह प्रतिक्रिया विलंबित थी।
निष्कर्ष: हमारे परिणाम बताते हैं कि यह नैनोलिटर ड्रॉपलेट सरणी-आधारित माइक्रोफ्लुइडिक प्लेटफ़ॉर्म विभिन्न प्रकार की सेलुलर प्रतिक्रियाओं में विविधता के आकलन, प्रारंभिक/विलंबित सिग्नलिंग घटनाओं का पता लगाने और प्रतिरक्षा कोशिकाओं की लाइव सेल फेनोटाइपिंग के लिए एक आशाजनक तकनीक है।