क्लिनिकल और प्रायोगिक नेत्र विज्ञान जर्नल
खुला एक्सेस
आईएसएसएन: 2155-9570
आईएसएसएन: 2155-9570
कल्पना सुरेश, एलन मैथ्यू पुन्नूस, सारा कुरुविला और तन्वी खन्ना
उद्देश्य: मानव कॉर्नियल एंडोथेलियल कोशिकाओं (HCECs) के पृथक्करण को मानकीकृत करना तथा पृथक HCECs के लिए एक ढांचे के रूप में मानव एमनियोटिक झिल्ली (HAM) का उपयोग करना।
विधियाँ: मानव एमनियोटिक झिल्ली को 37°C पर 60 मिनट के लिए डिस्पेस II की 1.2 यूनिट/ml का उपयोग करके विच्छेदित किया गया, उसके बाद यांत्रिक स्क्रैपिंग की गई। मानव दाता शव की आँखों से कॉर्नियल एंडोथेलियल और डेसेमेट की झिल्ली की चादरें छीली गईं जो शल्य चिकित्सा के उपयोग के लिए अनुपयुक्त थीं तथा 2 घंटे के लिए 37°C और 5% CO2 पर कोलेजनेज़ II घोल के 2 mg/ml के साथ एंजाइमेटिक रूप से पचाई गईं। पृथक कोशिकाओं को पूरक के साथ कल्चर माध्यम में फिर से निलंबित कर दिया गया तथा फाइब्रोब्लास्ट को हटाने के लिए चार घंटे के लिए बिना लेपित कल्चरवेयर पर चढ़ाया गया जो एंडोथेलियल कोशिकाओं की तुलना में अधिक तेजी से चिपकते हैं। प्रीप्लेटिंग के बाद, गैर-आसंजन कोशिकाओं को जिलेटिन लेपित डिश पर या ऑप्टिएम मीडिया में वृद्धि कारकों के साथ पूरक डेन्युड एमनियोटिक झिल्ली पर लगाया गया। कोशिकाओं का विश्लेषण आसंजन और बहुभुज आकारिकी के लिए माइक्रोस्कोपी द्वारा किया गया।
परिणाम: डेन्युड एमनियोटिक झिल्ली की माइक्रोस्कोपी ने कोई उपकला कोशिका अवशेष नहीं दिखाया। कॉर्निया के एंजाइमेटिक पाचन ने एंडोथेलियल कोशिकाओं के साथ अकोशिकीय डेसेमेट की चादरों को पीछे छोड़ दिया, जो कि प्रीप्लेटिंग के साथ व्यक्तिगत रूप से या समूहों में तैरते हुए अधिक फाइब्रोब्लास्ट मुक्त एंडोथेलियल सेल अलगाव में सहायता करते हैं। कुछ अलग-थलग कोशिकाएँ एमनियोटिक झिल्ली पर स्कैफ़ोल्ड करने में कामयाब रहीं और बाद के मीडिया प्रतिस्थापन के दौरान उस आसंजन को बनाए रखा।
निष्कर्ष: हल्के एंजाइम डिस्पेज़-II का उपयोग करके HAM के लंबे समय तक उपचार से झिल्ली का नक़्काशी होता है, जो कि काटे गए कॉर्नियल एंडोथेलियल कोशिकाओं के लिए एक सफल स्कैफ़ोल्ड के रूप में कार्य करता है। इस दृष्टिकोण को एंडोथेलियल सेल प्रसार के लिए एक लागत प्रभावी विकल्प के रूप में और कॉर्नियल ऊतक इंजीनियरिंग अध्ययनों के लिए इन विट्रो मॉडल के रूप में आगे खोजा जा सकता है।