जर्नल ऑफ़ मेडिकल डायग्नोस्टिक मेथड्स
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प्लाज्मा और ऑर्गेनेल झिल्लियों की अखंडता का मूल्यांकन करने के लिए शुक्राणु विशिष्ट दो-चरण डाई बहिष्करण परख - इंट्रा-साइटोप्लाज़मिक शुक्राणु इंजेक्शन के लिए शुक्राणु की गुणवत्ता आश्वासन के लिए नया दृष्टिकोण

सटोरू कानेको, युकी ओकाडा, कियोशी ताकामात्सू

उद्देश्य: प्लाज्मा और ऑर्गेनेल झिल्लियों का व्यापक मूल्यांकन मानव शुक्राणु प्रजनन क्षमता को समझने के लिए एक नया दृष्टिकोण है। वर्तमान अध्ययन ने मानव शुक्राणु में प्लाज्मा और ऑर्गेनेल झिल्लियों का मूल्यांकन करने के लिए शुक्राणु विशिष्ट 2-चरण डाई बहिष्करण परख के 2 प्रकार विकसित किए हैं।

विधियाँ: शुक्राणु विशिष्ट 2-चरण डाई बहिष्करण परख: शुक्राणु को आइसोटोनिक कल्चर माध्यम में प्रतिक्रियाशील लाल 195 (RR195) या Cy3- संयुग्मित कॉनकैनावैलिन ए (Cy3-con A) के साथ इनक्यूबेट किया गया था, उन्हें क्रमशः मेथनॉल के साथ प्लाज्मा झिल्ली के बहिष्करण के बाद प्रतिक्रियाशील नीले 222 या एलेक्सा 488 संयुग्मित कॉनकैनावैलिन ए के साथ काउंटरस्टेन किया गया था। माइटोकॉन्ड्रिया में ऑर्गेनेल झिल्ली की अखंडता को माइटो ट्रैकर एफएम के प्रतिधारण द्वारा देखा गया था। सेलआरओएक्स ऑरेंज ने प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों द्वारा ऑक्सीकरण पर नारंगी प्रतिदीप्ति का उत्पादन किया।

परिणाम: शुक्राणु विशिष्ट 2-चरण डाई बहिष्करण परख क्षतिग्रस्त प्लाज्मा और ऑर्गेनेल झिल्लियों के माध्यम से नाभिक में पहले डाई के पारगमन और बंधन से बना है, झिल्ली बहिष्करण के बाद, नए उजागर नाभिक या आंतरिक एक्रोसोमल झिल्ली को दूसरे डाई के साथ काउंटरस्टेन किया गया था। मानव गतिशील शुक्राणु (जीवित शुक्राणु; LS) में बरकरार प्लाज्मा और एक्रोसोमल झिल्लियों ने RR195 और Cy3-con A को बाहर रखा, लेकिन विकृत लोगों ने पारगमन की अनुमति दी। LS ने एक ओर रंगीन बुले या हरे रंग का प्रतिदीप्ति उत्पन्न किया, जबकि विकृत लोगों ने क्रमशः लाल या लाल प्रतिदीप्ति उत्पन्न की। माइटोकॉन्ड्रिया में माइटो ट्रैकर FM और सेलROX ऑरेंज के प्रतिदीप्ति ने बरकरार ऑर्गेनेल झिल्ली के साथ माइटोकॉन्ड्रिया में ऑक्सीडेटिव फॉस्फोराइलेशन की सामान्यता को प्रमाणित किया। व्युत्पन्न एकल-चरण RR195 बहिष्करण परख नैदानिक ​​ICSI में गतिशील शुक्राणु के इंट्रा-ऑपरेटिव गैर-विनाशकारी मूल्यांकन के लिए एक व्यवहार्य उम्मीदवार है।

निष्कर्ष: डाई बहिष्करण और प्रतिधारण परख शुक्राणु गुणों के पूर्व-ऑपरेटिव आकलन के रूप में योगदान करते हैं और संशोधित एकल-चरण डाई बहिष्करण परख क्रमशः नैदानिक ​​इंट्रा साइटोप्लाज़्मिक शुक्राणु इंजेक्शन में इंट्रा-ऑपरेटिव शुक्राणु चयन के लिए उपयोगी हो सकता है।