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शुक्राणु क्रोमेटिन संघनन स्तर: फिक्सेटिव पर निर्भर करता है

टुले इरेज़, तुगसे डुरमस

शुक्राणुजनन के दौरान शुक्राणु क्रोमेटिन संरचनात्मक परिवर्तनों से गुजरता है जिससे उच्च संघनन होता है। इस नाभिकीय विनिमय को शुक्राणु-निषेचन क्षमता और गर्भावस्था के परिणाम का पूर्वानुमान माना जाता है। विभिन्न अध्ययनों ने पुरुष बांझपन और शुक्राणु प्रोटीन की कमी के बीच संबंध दिखाया है, और यह सुझाव दिया गया है कि यह शुक्राणु डीएनए अखंडता का एक महत्वपूर्ण निर्धारक हो सकता है। एसिडिक एनिलिन ब्लू स्टेनिंग का उपयोग अक्सर ग्लूटाराल्डिहाइड फिक्सेशन के साथ किया जाता है और शुक्राणु नाभिक में लाइसिन के कारण हिस्टोन को दाग देता है। शोध से पता चला है कि शुक्राणु नाभिक में हिस्टोन का स्तर डीएनए क्षति और बांझपन से निकटता से संबंधित है। शुक्राणु क्रोमेटिन संघनन शुक्राणु नाभिक में प्रोटीन की उपस्थिति, यानी हिस्टोन की अनुपस्थिति द्वारा व्यक्त किया जाता है। इस अध्ययन में, हमने जांच की कि कैसे एनिलिन ब्लू स्टेनिंग विधि विभिन्न फिक्सेशन विधियों को लागू करने पर शुक्राणु क्रोमेटिन संघनन को सही ढंग से निर्धारित कर सकती है। इस अध्ययन में चार अलग-अलग फिक्सेटिव का इस्तेमाल किया गया। फिक्सेटिव को ग्लूटाराल्डिहाइड (2.5%), मेथनॉल/एसिटिक एसिड कार्नी, (3/1), एथिल अल्कोहल (98%), और फॉर्मेल्डिहाइड (10%) एनिलिन ब्लू डाई के साथ साइटोलॉजिकल तैयारियों में पारंपरिक सांद्रता में लगाया गया था। इन फिक्सेटिव में से, ग्लूटाराल्डिहाइड का उपयोग शुक्राणु हिस्टोन को प्रदर्शित करने के लिए व्यापक रूप से किया जाता है। विभिन्न फिक्सेटिव के बीच क्रोमेटिन संघनन (एनिलिन ब्लू नेगेटिव) दरों में अंतर की गणना करने के लिए छात्र-टी-परीक्षण और विचरण के दोहराए गए माप विश्लेषण किए गए थे। जब ग्लूटाराल्डिहाइड फिक्सेशन के साथ प्राप्त क्रोमेटिन संघनन मूल्यों की तुलना मेथनॉल और अल्कोहल फिक्सेशन के साथ प्राप्त मूल्यों से की गई, तो सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण अंतर (पी = 0.014, पी = 0.0001) देखे गए। ग्लूटाराल्डिहाइड और फॉर्मलडिहाइड के बीच एक सकारात्मक सहसंबंध (p=0.51), और ग्लूटाराल्डिहाइड और फॉर्मलडिहाइड, मेथनॉल/एसिटिक एसिड और अल्कोहल फिक्सेशन के बीच एक नकारात्मक सहसंबंध (p=0.005,p=0.0005 Ve p=0.0005,p=0.007) देखा गया। शुक्राणु एकाग्रता और गतिशीलता के साथ क्रोमेटिन संघनन का सकारात्मक सहसंबंध निर्धारित किया गया (p=0.012,p<0,001)। इस अध्ययन में प्राप्त परिणामों के अनुसार, 2.5% ग्लूटाराल्डिहाइड और 10% फॉर्मलडिहाइड फिक्सेशन एनिलिन ब्लू के साथ क्रोमेटिन संघनन का निर्धारण करने के लिए उपयुक्त थे, लेकिन मेथनॉल/एसिटिक एसिड और एथिल अल्कोहल इस उद्देश्य के लिए उपयुक्त नहीं है।