जर्नल ऑफ़ मेडिकल डायग्नोस्टिक मेथड्स
खुला एक्सेस

अमूर्त

अंतिम चरण डीएनए विखंडन के बिना और साथ शुद्ध मानव शुक्राणु के बीच अंतर-तुलनात्मक अध्ययन का उपयोग करके शुक्राणु क्रोमेटिन फैलाव परीक्षण और धूमकेतु परख का पुनर्वैधीकरण

सटोरू कानेको*, कियोशी ताकामात्सू

उद्देश्य: शुक्राणु क्रोमेटिन फैलाव परीक्षण (SCD) और धूमकेतु परख (CA) के सिद्धांतों और मात्रात्मक प्रदर्शन को पुनः सत्यापित करने के लिए अंतर-तुलनात्मक अध्ययन करना।

विधियाँ: अंतिम चरण के विखंडन में दानेदार टुकड़ों के बिना और साथ वाले मानव शुक्राणु को नॉर्मोज़ोस्पर्मिक वीर्य से शुद्ध किया गया और प्राकृतिक रूप से होने वाले नकारात्मक और सकारात्मक नियंत्रण (क्रमशः एनसी और पीसी) के रूप में इस्तेमाल किया गया। SCD और CA दोनों ने 2.0 mol/L NaCl, 1.0 mmol/L DTT के साथ न्यूक्लियोप्रोटीन निकाले। SCD ने निर्धारित किया कि डीएनए क्षति बैंगनी प्रभामंडल के क्षेत्र के व्युत्क्रमानुपाती है। सीए ने दानेदार टुकड़ों की संख्या से इलेक्ट्रोफोरेटिक रूप से डीएनए क्षति के स्तर का अनुमान लगाया; तथाकथित धूमकेतु पूंछ, उनकी इलेक्ट्रोफोरेटिक विशेषताओं की तुलना सिंगल-सेल पल्स्ड-फील्ड जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस (SCPFGE) से की गई।

परिणाम: एससीडी में बैंगनी प्रभामंडल को क्रिस्टल बैंगनी (सीवी)-स्टेनेबल न्यूक्लियोप्रोटीन से युक्त पाया गया जो विकिरणित डीएनए फाइबर से चिपके हुए थे। एससीडी एनसी और पीसी के बीच अंतर नहीं कर सका। अवशिष्ट न्यूक्लियोप्रोटीन ने प्राकृतिक सीए में डीएनए के प्रवास को अवरुद्ध कर दिया; इसके विपरीत, इन-जेल ट्रिप्टिक पाचन के साथ एससीपीएफजीई ने लम्बी डीएनए फाइबर से परे रेशेदार और दानेदार टुकड़ों को डिस्चार्ज किया। क्षारीय सीए को 0.3 मोल/एल NaOH में डीएनए चलाया गया। हालाँकि डीएनए को दानेदार टुकड़ों में काट दिया गया था, लेकिन अवशिष्ट न्यूक्लियोप्रोटीन ने डीएनए से अपनी बंधन क्षमता को बनाए रखा और अभी भी नए उत्पन्न टुकड़ों को ठीक किया।

निष्कर्ष: डीएनए विखंडन विश्लेषण के लिए अलग-अलग गतिशील शुक्राणुओं में विखंडन के प्रारंभिक चरण को मापने की आवश्यकता होती है, प्रोटियोलिसिस की कमी तटस्थ और क्षारीय सीए के मात्रात्मक प्रदर्शन को कम करती है। कुल मिलाकर, परिणामों ने सुझाव दिया कि नैदानिक ​​सांख्यिकी के लिए डेटा एकत्र करने के लिए उपकरण के रूप में एससीडी और सीए अपर्याप्त रूप से संवेदनशील थे।