जीवविज्ञान और चिकित्सा में उन्नत तकनीकें
खुला एक्सेस
आईएसएसएन: 2379-1764
आईएसएसएन: 2379-1764
ज़की ए शेरिफ और कैरोलिन डब्ल्यू ब्रूम
पृष्ठभूमि: गैल-32 एक चीनी हम्सटर फेफड़े की कोशिका परमाणु उत्परिवर्ती है जो माइटोकॉन्ड्रियल प्रोटीन संश्लेषण में दोष के कारण गैलेक्टोज में बढ़ने में असमर्थ है। चूंकि गैल-32 जीन का उत्पाद अज्ञात था, इसलिए गैल-32 उत्परिवर्तन को ठीक करने वाले मानव जीन को क्लोन करने के लिए फेनोटाइपिक पूरकता का उपयोग करना अनिवार्य था।
परिणाम: अप्रभावी गैल-32 कोशिकाओं को मानव जीनोमिक लाइब्रेरी से पीएसवी2-नियो प्लास्मिड डीएनए और पुनः संयोजक डीएनए के साथ सह-रूपांतरित किया गया, जिसमें प्रमुख मानव गैल+ जीन और पीएसवी13 वेक्टर में मौजूद क्लोरैम्फेनिकॉल-प्रतिरोध (कैमर) जीन शामिल थे। प्राथमिक ट्रांसफॉर्मेंट्स को गैलेक्टोज और नियोमाइसिन एनालॉग जी418 में वृद्धि द्वारा चुना गया था। मानव गैल+ जीन को बचाने के लिए, प्राथमिक ट्रांसफॉर्मेंट डीएनए और पीसीवी108 कॉस्मिड वेक्टर के साथ एक जीनोमिक लाइब्रेरी का निर्माण किया गया था। कैमर जीन का उपयोग आस-पास के मानव अनुक्रमों वाले क्लोन की पहचान करने के लिए किया गया था। दो कैमर, एलु-हाइब्रिडाइजिंग क्लोन से डीएनए अप्रभावी गैल-32 कोशिकाओं को गैल+ फेनोटाइप में बदलने और माइटोकॉन्ड्रियल प्रोटीन संश्लेषण को बहाल करने में सक्षम था।
निष्कर्ष: ये आंकड़े दो pCV108-परिवर्तक पुनः संयोजक क्लोनों के पृथक्करण को प्रदर्शित करते हैं, जिनमें एक मानव जीन होता है जो चीनी हैम्स्टर गैल-32 उत्परिवर्तन को पूरक करता है और गैलेक्टोज चयापचय को पुनर्स्थापित करता है।