जर्नल ऑफ़ मेडिकल डायग्नोस्टिक मेथड्स
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शुक्राणु क्रोमेटिन संरचना परख (एससीएसए) का पुनर्मूल्यांकन

सटोरू कानेको, कियोशी ताकामात्सू

एक्रिडीन ऑरेंज (AO) के बहुवर्णी प्रतिदीप्ति पर आधारित शुक्राणु क्रोमेटिन संरचना परख (SCSA) का उपयोग मानव शुक्राणु नाभिक में DNA क्षति का निरीक्षण करने के लिए व्यापक रूप से किया जाता है। SCSA के सिद्धांत का पुनर्मूल्यांकन करने के लिए, 87% की नकारात्मक DNA विखंडन दर वाले मानव गतिशील शुक्राणु को नकारात्मक नियंत्रण (NC) के रूप में तैयार किया गया और NC के ताप विकृतीकरण के माध्यम से सकारात्मक नियंत्रण (PC) तैयार किया गया। नियंत्रण के लिए AO की रंगाई की तुलना सूक्ष्म, इलेक्ट्रोफोरेटिक और फ्लो साइटोमेट्रिक अवलोकनों के आधार पर की गई। मानव गतिशील शुक्राणुओं को पेरकोल घनत्व ढाल सेंट्रीफ्यूजेशन और उसके बाद स्विम अप के माध्यम से अलग किया गया। फिर, सिंगल-सेल पल्स-फील्ड जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस की सहायता से DNA विखंडन देखा गया।

हमने पाया कि AO अणु ने उत्तेजना तरंगदैर्ध्य के आधार पर लाल और हरा प्रतिदीप्ति उत्सर्जित किया। ट्रिप्सिन के साथ इन-जेल पाचन के बाद AO सांद्रता में वृद्धि और लाल प्रतिदीप्ति की कमी के कारण दोनों नियंत्रणों का रंग हरे से लाल में बदल गया। NC का रंग लाल से हरा और DNA विखंडन फोटो-ब्लीचिंग के दौरान समवर्ती रूप से हुआ। NC और PC के साइटोग्राम एक दूसरे के समान थे। ये तथ्य SCSA सिद्धांत के साथ संघर्ष करते हैं। हरे और लाल प्रतिदीप्ति क्रमशः AO के DNA में अंतर्ग्रहण और AO के प्रोटीन में अवशोषण के कारण उत्सर्जित हुए, और उनके विलय से रंग में भिन्नता आई। फोटो-ब्लीचिंग के दौरान लाल से हरे रंग में परिवर्तन संभवतः इसलिए देखा गया क्योंकि अंतर्ग्रहण AO से हरा प्रतिदीप्ति कुछ प्रोटीन में AO के अवशोषण से लाल प्रतिदीप्ति की तुलना में प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों के प्रति अधिक सहनशील था। कुल मिलाकर, SCSA मानव शुक्राणु नाभिक में DNA क्षति का पता नहीं लगा सकता है।