जर्नल ऑफ़ सेल साइंस एंड थेरेपी
खुला एक्सेस

अमूर्त

न्यूक्लियोलिन Hsp72 को प्लाज्मा झिल्ली तक पहुंचाता है ताकि इसे सूक्ष्म वातावरण में छोड़ा जा सके

Appukuttan NR Pradeep, Alexzander Asea and Punit Kaur

उद्देश्य: हमारे पिछले अध्ययनों ने दर्शाया है कि तापीय तनाव, पारंपरिक प्रोटीन परिवहन मार्ग से स्वतंत्र तंत्र द्वारा कोशिकाओं से Hsp72 की रिहाई को प्रेरित करता है। हालाँकि, सटीक तंत्र जिसके द्वारा Hsp72, एक लीडरलेस प्रोटीन, बाह्यकोशिकीय वातावरण तक पहुँच प्राप्त करता है, अज्ञात है। सामग्री और विधियाँ: यह अध्ययन उस तंत्र को निर्धारित करने के लिए डिज़ाइन किया गया है जिसके द्वारा इंट्रासेल्युलर Hsp72 ट्रैफ़िकिंग और रिलीज़ होती है। इस अध्ययन में प्रस्तुत डेटा वेस्टर्न ब्लॉटिंग और फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग करके इंट्रासेल्युलर Hsp72 ट्रैफ़िकिंग का सुझाव देता है। इसके अलावा, इन-जेल पाचन और LC-MS/MS करते हुए अज्ञात झिल्ली से बंधे प्रोटीन की पहचान की गई। परिणाम: हम प्रदर्शित करते हैं कि कोशिकाओं के हीट शॉक उपचार के पहले संपर्क के 60 मिनट के भीतर, प्लाज्मा झिल्ली से बंधा Hsp72 बह जाता है और साइटोसोलिक डिब्बों में पुनर्वितरित हो जाता है। साइटोकैलासिन बी के साथ कोशिकाओं के पूर्व-उपचार द्वारा सक्रिय कोशिका परिवहन के अवरोध ने प्लाज्मा झिल्ली से साइटोसोल में Hsp72 पुनर्वितरण को पूरी तरह से समाप्त कर दिया। प्लाज्मा झिल्ली से बंधे प्रोटीन को Hsp72 के साथ जोड़ने के बाद वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण और LC-MS/MS विश्लेषण से Hsp72 के साथ कम से कम सात इंटरैक्टिंग पार्टनर्स का पता चला, जिसमें न्यूक्लियोलिन, Hsp90, gp96, CAP2, TLR2, 4 और 7 शामिल हैं। न्यूक्लियोलिन-siRNA के साथ कोशिकाओं के ट्रांसफ़ेक्शन ने बेसलाइन और हीट शॉक से प्रेरित Hsp72 रिलीज़ को पूरी तरह से रोक दिया। निष्कर्ष: कुल मिलाकर, यह अध्ययन पहली बार दर्शाता है कि प्लाज्मा झिल्ली Hsp72 के लिए एक जलाशय के रूप में कार्य करती है और सुझाव देती है कि न्यूक्लियोलिन Hsp72 ट्रैफ़िकिंग और रिलीज़ में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है।