क्लिनिकल और सेलुलर इम्यूनोलॉजी जर्नल
खुला एक्सेस

अमूर्त

miR-24 मैक्रोफेज ध्रुवीकरण और प्लास्टिसिटी को नियंत्रित करता है

जेज़्रोम बी. फोर्डहम, अफसर आर. नकवी और साल्वाडोर नारेस

उद्देश्य: माइक्रोआरएनए (miRNA) मानव जीव विज्ञान और प्रतिरक्षा के सर्वव्यापी विनियामक हैं। पहले, हमने एस्चेरिचिया कोली और स्टैफिलोकोकस ऑरियस बायोपार्टिकल्स के फेगोसाइटोसिस और उसी मूल के लिपोपॉलीसेकेराइड (LPS) की प्रतिक्रिया में साइटोकाइन स्राव के प्रेरण में miR-24 की निरोधात्मक भूमिका का प्रदर्शन किया है; साथ ही, हमने पीरियडोंटोपैथिक रोगजनकों एग्रीगेटिबैक्टर एक्टिनोमाइसेटेमकोमिटम्स (Aa) और पोर्फिरोमोनस जिंजिवलिस (Pg) से LPS के लिए भिन्न और अभिसारी miRNA प्रतिक्रियाओं की पहचान की है, और सिगरेट के धुएं के अर्क को Pg LPS संरचना (Pg CSE) के पर्यावरणीय संशोधक के रूप में मैक्रोफेज miRNA प्रतिक्रियाओं को प्रभावित करने के रूप में प्रकट किया है। इस अध्ययन को मैक्रोफेज ध्रुवीकरण और प्लास्टिसिटी पर miR-24 की भूमिका की जांच करने के लिए डिज़ाइन किया गया था।

विधियाँ: प्राथमिक मानव मैक्रोफेज को परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं (PBMCs) से अलग किए गए CD14+ मोनोसाइट्स से MACS पॉजिटिव चयन द्वारा विभेदित किया गया और miR-24 miRNA मिमिक्स, अवरोधकों या नकारात्मक नियंत्रण मिमिक्स के साथ ट्रांसफ़ेक्ट किया गया; इसके बाद मैक्रोफेज सक्रियण के प्रमुख चरणों का प्रतिनिधित्व करने वाली विभिन्न स्थितियों के तहत साइटोकिन्स और/या LPS के साथ उत्तेजना की गई। मैक्रोफेज सक्रियण और ध्रुवीकरण का मूल्यांकन साइटोकाइन उत्पादन (ELISA) और प्रोटीन अभिव्यक्ति (फ्लो साइटोमेट्री, इम्युनोब्लॉट) के लिए परख का उपयोग करके किया गया। MiR-24 अभिव्यक्ति का मूल्यांकन RT-PCR द्वारा किया गया।

परिणाम: एए, पीजी और पीजी सीएसई मूल के एलपीएस के साथ मैक्रोफेज की उत्तेजना के परिणामस्वरूप साइटोकाइन अभिव्यक्ति के भिन्न स्तर और miR-24 की भिन्न अभिव्यक्ति हुई। miR-24 की अधिक अभिव्यक्ति ने LPS के जवाब में साइटोकाइन स्राव को बाधित किया। इंटरफेरॉन गामा (IFN-γ) के साथ मैक्रोफेज की प्राइमिंग ने इस निरोधात्मक प्रभाव को दूर नहीं किया, लेकिन IFN-γ प्लस TNF-α, TNF-β, या IL-17 के साथ मैक्रोफेज की शास्त्रीय सक्रियता ने साइटोकाइन-विशिष्ट तरीके से miR-24 मध्यस्थता दमन के पैटर्न को संशोधित किया। miR-24 की अधिक अभिव्यक्ति ने वैकल्पिक मैक्रोफेज सक्रियण के दौरान CD206 अपरेगुलेशन को बढ़ाया और वैकल्पिक से शास्त्रीय सक्रियण अवस्थाओं में मैक्रोफेज संक्रमण में इसके डाउनरेगुलेशन को बाधित किया। miR-24 की अधिक अभिव्यक्ति के परिणामस्वरूप क्लास 1A PI 3-काइनेज सबयूनिट p110 डेल्टा (p110δ) की अभिव्यक्ति कम हुई।

निष्कर्ष: LPS में रोगजनक और पर्यावरण-विशिष्ट संशोधन मानव मैक्रोफेज में साइटोकाइन्स और miR-24 की अभिव्यक्ति को बदलते हैं। MiR-24 LPS द्वारा मैक्रोफेज शास्त्रीय सक्रियण का एक नकारात्मक नियामक है और ध्रुवीकरण और प्लास्टिसिटी की स्थितियों के तहत वैकल्पिक सक्रियण को बढ़ावा देता है। LPS प्रेरित साइटोकाइन स्राव का MiR-24 मध्यस्थता अवरोध उत्तेजना के बिंदु पर मैक्रोफेज सक्रियण स्थिति पर निर्भर करता है, और यह इस बात के कारण हो सकता है कि p110δ किस हद तक इंट्रासेल्युलर सिग्नलिंग मार्ग/मार्गों में शामिल है जो रिसेप्टर बंधन को साइटोकाइन प्रेरण में परिवर्तित करता है। जबकि मैक्रोफेज पर miR-24 के प्रभाव में महत्वपूर्ण अंतर देखे गए, ये डेटा संकेत देते हैं कि miR-24 की अधिक अभिव्यक्ति मुख्य रूप से सूजनरोधी होगी।