एंजाइम इंजीनियरिंग
खुला एक्सेस

अमूर्त

भारतीय प्रमुख कार्प, कैटला कैटला (कैटला) से लाइपेस की द्वितीयक संरचना और गतिज अध्ययन का पृथक्करण, शुद्धिकरण और लक्षण वर्णन

कामेश्वर शर्मा वाईवीआर, नीलिमा बूरा और प्रसिद्धि त्यागी

लाइपेस सर्वव्यापी एंजाइम हैं जो जल लिपिड इंटरफेस पर वसा के हाइड्रोलिसिस को फैटी एसिड और ग्लिसरॉल में उत्प्रेरित करते हैं और गैर-जलीय मीडिया में प्रतिक्रिया को उलट देते हैं। लाइपेस ओलियोकेमिस्ट्री, कार्बनिक संश्लेषण, डिटर्जेंट निर्माण और पोषण में अपने नए और बहुआयामी अनुप्रयोगों के कारण जैव उत्प्रेरकों के बीच प्रमुख स्थान रखते हैं। लाइपेस को कैटला कैटला (कैटला) के पाचन नली और पाचन आंत से निकाला और अलग किया गया। ऊतक को शुरुआती बफर (0.01 एम ट्रिसएचसीएल, पीएच 7.2) के साथ 1:3 के अनुपात में समरूप बनाया गया था। इस प्रकार प्राप्त कच्चे अर्क को अमोनियम सल्फेट (20-80%) का उपयोग करके अवक्षेपित किया गया था। डायलिसिस द्वारा अतिरिक्त नमक को हटा दिया गया और परिणामी डायलिसेट (डिसल्टेड एंजाइम) को 0.5 मिली / मिनट की प्रवाह दर पर आयन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी के लिए डीईएई-सेल्यूलोज कॉलम के अधीन किया गया। प्रारंभिक बफर में NaCl (100-800 mM) के स्टेप ग्रेडिएंट द्वारा निक्षालन किया गया। सक्रिय अंशों को शुद्ध अंश (PF) के रूप में एकत्र किया गया और pH, तापमान और एंजाइम गतिविधि पर कैल्शियम के प्रभाव, संरचनात्मक लक्षण वर्णन, आणविक लक्षण वर्णन और गतिज अध्ययनों के लिए भौतिक लक्षण वर्णन के लिए उपयोग किया गया। शुद्ध अंश (PF) ने 1438.72 U/mg की अंतिम विशिष्ट गतिविधि दिखाई। इष्टतम pH 7.8 था और इष्टतम तापमान 20ËšC पाया गया। गलनांक (Tm) मान 42ËšC था और शुद्ध लाइपेस की सक्रियण ऊर्जा 34.82 KJ/mol/K थी। लाइपेस की ऊष्मीय स्थिरता 20ËšC पर पाई गई। प्रारंभिक बफर में 10 mM और 20 mM CaCl2 के साथ 3 घंटे तक लाइपेस गतिविधि बरकरार रही। यह दर्शाता है कि कैल्शियम में एंजाइम के विकृतीकरण से गुण बढ़ाने की क्षमता है। pNPP के हाइड्रोलिसिस के लिए भारतीय मेजर कार्प, कैटला से लाइपेस का माइकेलिस-मेन्टेन स्थिरांक (Km) 6.695 mM था। लाइपेस (कैटला) की टर्नओवर संख्या (kcat) 0.0022 s-1 थी। लाइपेस की उत्प्रेरक दक्षता (kcat/Km) 0.0003412 s-1 mM-1 थी। शुद्ध लाइपेस (PF) के SDS-PAGE ने 70 kDa के आणविक द्रव्यमान के साथ एक समरूप एकल बैंड का खुलासा किया। सर्कुलर डाइक्रोइज्म का उपयोग करके शुद्ध लाइपेस के α हेलिक्स और β स्ट्रैंड की द्वितीयक संरचनात्मक व्यवस्था क्रमशः 48.51% और 9.74% परिणाम देती है।