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एंजाइम द्वारा जीन उत्परिवर्तन की खोज: एक सरल और अत्यधिक नाजुक एंजाइम मिसमैच क्लीवेज विधि के लिए चिप्स

वोस्कारिडेस के

परमाणु विज्ञान के कई क्षेत्रों में अज्ञात डीएनए किस्मों की गारंटी महत्वपूर्ण मामलों में से एक है। इस कारण से सेंगर अनुक्रमण का उपयोग दैनिक अभ्यास में किया गया है। हालाँकि, जब आपको एक बड़े आकार के डीएनए या प्रचुर नमूनों को देखने की आवश्यकता होती है, तो यह तकनीक परेशानी भरी, महंगी और थकाऊ होती है। हाल ही में, भविष्य अनुक्रमण (NGS) का उपयोग परिवर्तन स्क्रीनिंग के विभिन्न उद्देश्यों में किया गया है। यह विशाल अनुक्रमण तकनीक जीनोम आकार स्क्रीनिंग के आकार के लिए उपयुक्त है, साथ ही उन गुणों की सूची की निगरानी करने के लिए भी उपयुक्त है जो समान समूहों का कारण बनते हैं, जैसे कि युवाओं में विकास शुरू करने वाला मधुमेह (MODY)। यदि एक ही बार में पर्याप्त नमूने एकत्र किए जाते हैं, तो NGS एक सुखद और आकर्षक प्रणाली है, क्योंकि परीक्षणों को एकत्रित करने से प्रति परीक्षण परिचालन लागत कम हो जाती है। हालाँकि, यदि आपको एक परीक्षण द्वारा 10~50 kb डीएनए समूहीकरण की जाँच करने की अपेक्षा की जाती है, तो आपको एक प्रभावी और उपयोगी स्क्रीनिंग रणनीति की आवश्यकता होती है। आम तौर पर, सिंगल-स्ट्रैंड अनुकूलन बहुरूपता (SSCP) और हेटेरोडुप्लेक्स जांच (HA) इस कारण से सबसे अधिक उपयोग की जाने वाली तकनीकें थीं। हालाँकि, इन तकनीकों की संवेदनशीलता गहन परीक्षण के लिए स्वीकार्य नहीं थी। हालाँकि कई संशोधित PCR आधारित रूपांतरण स्क्रीनिंग रणनीतियाँ जारी की गई हैं, लेकिन इनमें से कोई भी कम संवेदनशीलता या संभावित बोझ के कारण लोकप्रिय नहीं हुई। HA के लिए दो संशोधित रणनीतियाँ, डीनेचुरिंग एंगल जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस (DGGE) और तापमान कोण जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस (TGGE), जेल भाग या तापमान को बदलकर जेल में हेटेरोडुप्लेक्स DNA के स्थानांतरण विलंब को बेहतर बनाने के लिए बनाई गई थीं। हालाँकि इन रणनीतियों का HA पर लाभ हो सकता है, लेकिन उन्हें जेल को चलाने या बनाने के लिए विशेष गियर की आवश्यकता होती है। इस तरह, ये संशोधित तकनीकें मूल HA जितनी लोकप्रिय नहीं हुई हैं। डीनेचुरिंग एलीट फ्लूइड क्रोमैटोग्राफी (DHPLC) एक प्रकार की पोर्टेबिलिटी मूव जांच है जिसमें इलेक्ट्रोफोरेसिस शामिल नहीं है, बल्कि HPLC भाग में हेटेरोडुप्लेक्स के कम रखरखाव के मौसम के आधार पर परिवर्तनों की पहचान करता है। यद्यपि यह नया आविष्कार उच्च संवेदनशीलता प्राप्त करता है, लेकिन प्रत्येक डीएनए समूह के लिए परिवर्तन पहचान स्थितियों में क्रमिक सुधार की आवश्यकता है ताकि अधिकतम संवेदनशीलता प्राप्त की जा सके। एक आदर्श परिवर्तन स्क्रीनिंग तकनीक के लिए केवल पारंपरिक उपकरण और अभिकर्मकों की आवश्यकता होगी; एक एकल प्रणाली को किसी भी डीएनए समूह और परिवर्तन प्रकारों पर लागू किया जा सकता है; और उच्च संवेदनशीलता, उच्च थ्रूपुट और महत्वपूर्ण लागत निष्पादन प्राप्त होगा। रासायनिक बंगला विखंडन (EMC) संभवतः इन मानकों को पूरा करता है।