जर्नल ऑफ़ सेल साइंस एंड थेरेपी
खुला एक्सेस

अमूर्त

चूहों में शुक्राणुजनन के दौरान सी-किट ट्रांसजीन निर्माण का डिजाइन और आणविक लक्षण वर्णन

Swanand Koli, Arun P Sikarwar, Murali R Babu and Reddy KVR

प्रसवोत्तर वृषण में, अविभेदित प्रकार-ए स्पर्मेटोगोनियल स्टेम सेल (एसएससी) सी-किट की उपस्थिति में टाइप-बी स्पर्मेटोगोनियल कोशिकाओं (एसजीसी) में विभेदित होते हैं, जो स्तनधारियों में शुक्राणुजनन के दौरान एक कोशिका/चरण विशिष्ट तरीके से व्यक्त होता है। सी-किट को सख्त ट्रांसक्रिप्शनल नियंत्रण के अधीन किया जाता है क्योंकि यह न केवल जर्म कोशिकाओं के लिए बल्कि हेमेटोपोएटिक स्टेम कोशिकाओं और मेलानोसाइट्स के विकास के लिए भी आवश्यक है। हालांकि, सी-किट अभिव्यक्ति एक गतिशील रूप से विनियमित प्रक्रिया है, शुक्राणुजनन के दौरान इसके ट्रांसक्रिप्शनल विनियमन के लिए आणविक आधार ज्यादातर अज्ञात रहता है। अध्ययन का उद्देश्य यह निर्धारित करना है कि Wv/Wv उत्परिवर्ती चूहों से अलग किए गए सी-किट नकारात्मक एसएससी में सी-किट अभिव्यक्त करने वाले ट्रांसजीन निर्माण की शुरूआत प्राप्तकर्ता चूहों के वृषण में विभेदित और उपनिवेशित होगी या नहीं। इस उद्देश्य के लिए, 7.4 kb pG1-Kit-ORF-GFP ट्रांसजीन निर्माण जिसमें 4.4 kb c-Kit-ORFGFP अभिव्यक्ति कैसेट शामिल है, डिज़ाइन किया गया था और इसके इन विट्रो अभिव्यक्ति की पुष्टि इम्यूनोफ्लोरेसेंस और फ्लोसाइटोमेट्री विश्लेषण द्वारा की गई थी। परिणामों की तुलना के लिए, तीन नियंत्रण-GFP निर्माण, जिनमें 1.1 kb (c-Kit प्रमोटर और ORF दोनों की कमी), 4.1kb (c-Kit प्रमोटर की कमी) और 1.4 kb (c-kit-ORF की कमी) भी डिज़ाइन किए गए और इलेक्ट्रोपोरेशन (EP) द्वारा SSC में पेश किए गए। इन SSC को जर्म सेल ट्रांसप्लांटेशन (GCT) दृष्टिकोण का उपयोग करके रीटे के माध्यम से बुसुल्फ़ान उपचारित प्राप्तकर्ता बांझ चूहों के वृषण में पेश किया गया। यह देखा गया कि सी-किट-ओआरएफ-जीएफपी ट्रांसजीन इंसर्ट ले जाने वाले एसएससी नियंत्रण की तुलना में प्राप्तकर्ता चूहों की शुक्राणु नलिकाओं में अन्य जर्म सेल वंशों में उपनिवेश और विभेदित करने में सक्षम थे। निष्कर्ष में, वृषण Wv/Wv उत्परिवर्ती चूहों में एसएससी की आबादी है, जिसमें सी-किट सिग्नलिंग का कार्य पहली बार बिगड़ा है, हम रिपोर्ट करते हैं कि प्राप्तकर्ता बांझ चूहों में एसएससी का कार्य सी-किट-ओआरएफ-जीएफपी ट्रांसजीन इंसर्ट की शुरूआत के साथ फिर से शुरू हो सकता है। इस प्रकार वर्तमान निष्कर्षों का प्रजनन शरीर विज्ञान को समझने और वृषण विफलता वाले रोगियों में भविष्य के नए उपचारों की क्षमता पर महत्वपूर्ण प्रभाव हो सकता है।