क्लिनिकल और प्रायोगिक नेत्र विज्ञान जर्नल
खुला एक्सेस

अमूर्त

ट्रैबेकुलर मेशवर्क कोशिकाओं में नियंत्रण योग्य यूरोकाइनेज जीन अभिव्यक्ति

मेई त्सुदा, शिहो कानेको, अकीरा एंडो, तेत्सुया निशिमुरा, एमिको ओकुडा-अशिताका, सेइजी इटो, मकोतो ताओमोटो, मियो मात्सुमुरा और कांजी ताकाहाशी

उद्देश्य: ग्लूकोमा एक प्रकार का प्रगतिशील ऑप्टिक न्यूरोपैथी है जो अंततः बढ़े हुए इंट्राओकुलर प्रेशर (IOP) से संबंधित अंधेपन की ओर ले जाता है। ट्रेबिकुलर मेशवर्क (TM) और जक्सटा-कैनालिकुलर संयोजी ऊतकों में एक्स्ट्रासेलुलर मैट्रिक्स का संचय, जो एक जलीय बहिर्वाह मार्ग बनाता है, बढ़े हुए IOP का एक प्रमुख कारण हो सकता है, इस प्रकार फाइब्रिनोलिटिक सिस्टम IOP के विनियमन से जुड़ा हो सकता है। हमने TM कोशिकाओं में नियंत्रण योग्य यूरोकाइनेज प्लास्मिनोजेन एक्टिवेटर (uPA) जीन स्थानांतरण की संभावना की जांच की।
विधियाँ: TM कोशिकाओं को सूअर की आँखों और ट्रेबेक्यूलेक्टोमी प्रक्रियाओं के दौरान प्राप्त मानव TM कोशिकाओं से ताज़ा रूप से अलग किया गया और उनका संवर्धन किया गया। मानव TM कोशिकाओं से कुल RNA निकाला गया और cDNA में रिवर्स ट्रांसक्रिप्ट किया गया। फिर uPA की जीन अभिव्यक्ति का पता लगाने के लिए एक रिवर्स-ट्रांसक्रिप्टेड पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन (RT-PCR) विधि का प्रदर्शन किया गया। मानव uPA के cDNA को अभिव्यक्ति वेक्टर (pEYFP-N1 वेक्टर) और नियंत्रणीय अभिव्यक्ति वेक्टर (TRE-Tight वेक्टर) में उप-क्लोन किया गया, फिर प्रत्येक वेक्टर को स्वतंत्र रूप से सुसंस्कृत पोर्सिन TM कोशिकाओं में स्थानांतरित किया गया। pTet-ON और TRE-Tight वेक्टर को सक्रिय करने के लिए संस्कृति माध्यम में डॉक्सीसाइक्लिन मिलाया गया। अंत में, एंजाइम लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (ELISA) का उपयोग करके uPA की अभिव्यक्ति की जाँच की गई।
परिणाम: ELISA निष्कर्षों ने सुसंस्कृत पोर्सिन TM कोशिकाओं से माध्यम में uPA (3.5 ng/ml) की अभिव्यक्ति का खुलासा किया, जिन्हें pEYFP-N1 वेक्टर का उपयोग करके मानव uPA जीन के साथ स्थानांतरित किया गया था। डॉक्सीसाइक्लिन ने pTet-On और TRE-Tight वेक्टर में मानव uPA को मानव uPA जीन के साथ सह-संक्रमित TM कोशिकाओं में खुराक पर निर्भर तरीके से प्रेरित किया।
निष्कर्ष: uPA का नियंत्रण योग्य जीन स्थानांतरण, जो जक्सटा-कैनालिकुलर संयोजी ऊतक में बाह्य कोशिकीय मैट्रिक्स को ख़राब कर सकता है, TM कोशिकाओं में एक टेट-ऑन प्रणाली का उपयोग करके प्राप्त किया गया था। वर्तमान विधि ग्लूकोमा के लिए एक नई चिकित्सा के रूप में उपयोगी हो सकती है।