एप्लाइड फार्मेसी के जर्नल
खुला एक्सेस

अमूर्त

आनुवंशिक रूप से इंजीनियर साइट बी5-सीवाईपी3ए4 फ्यूजन प्रोटीन का पीओआर के साथ एसएफ9 कीट कोशिकाओं में सह-अभिव्यक्ति और इन विट्रो में व्यक्त उत्पादों का कार्यात्मक लक्षण वर्णन

झांगमिंग ज़ी, शब्बीर अहमद, वेनहुई लियू, सिसी कोंग, यिंगचुन जू, टिंग लियू और शुकिंग चेन

मानव साइटोक्रोम P450 3A4 (CYP3A4) यकृत में सबसे प्रचुर मात्रा में पाया जाने वाला चरण I दवा-चयापचय एंजाइम है, और बाजार में लगभग 50% दवाएं CYP3A4 द्वारा चयापचयित होती हैं। इसलिए, कई इन विट्रो अध्ययनों ने इन विवो में संभावित दवा-दवा अंतःक्रियाओं (DDI) का मूल्यांकन करने के लिए स्क्रीनिंग टूल के रूप में पुनः संयोजक CYP3A4 पर भरोसा किया। हालाँकि, उच्च उत्प्रेरक गतिविधि वाले पुनः संयोजक CYP3A4 के बारे में सीमित जानकारी उपलब्ध है। इसलिए, वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य उच्च उत्प्रेरक गतिविधि वाले पुनः संयोजक CYP3A4 को प्राप्त करना और इन विट्रो में इसके कार्यों को चिह्नित करना था। विषम रूप से व्यक्त CYP3A4 की उत्प्रेरक गतिविधियों को बढ़ाने के लिए, एंजाइम को साइटोक्रोम b5 (b5) टेल-टू-हेड से जोड़ा गया था, और जुड़े हुए एंजाइम को sf9 कोशिकाओं में एक साथ अभिव्यक्ति प्राप्त करने के लिए NADPH-P450 रिडक्टेस (POR) के साथ एक एकल प्लास्मिड में डाला गया था। यहाँ, संलयित एंजाइम के सब्सट्रेट बाइंडिंग एफिनिटी, एंजाइमेटिक गतिविधियों और इन विट्रो DDIs में अनुप्रयोगों की जाँच की गई। POR-cyt b5CYP3A4 का पृथक्करण स्थिरांक Kd 8.3 ± 0.87 μmol/L था, टेस्टोस्टेरोन के चयापचय में POR-cyt b5CYP3A4 के लिए क्लिंट (क्लिंट=Vmax/Km) 8.57 mL/min/g प्रोटीन था और मिडाज़ोलम के लिए 150.3 mL/min/g प्रोटीन था। इसके अलावा, टेस्टोस्टेरोन चयापचय पर केटोकोनाज़ोल का निरोधक स्थिरांक Ki 0.013 ± 0.0038 μmol/L था। वर्तमान परिणामों ने संलयित एंजाइम के लिए सब्सट्रेट बाइंडिंग एफिनिटी और एंजाइमेटिक गतिविधि में उल्लेखनीय वृद्धि का सुझाव दिया। इस प्रकार, यह निर्माण इन विट्रो में CYP3A4 से जुड़े ड्रग मेटाबोलिज्म और DDIs जांच के अध्ययन में सहायक हो सकता है। इसके अलावा, संयोजित एंजाइम और POR की एक साथ अभिव्यक्ति, CYP3A4/POR/b5 के अधिक स्थिर मोलर अनुपात के आधार पर अधिक पुनरुत्पादनीय परिणाम प्रदान कर सकती है।